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GenCut快速内切酶是经过基因工程重组的限制性内切酶，可在5～15分钟内精确完成DNA切割，适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。GenCut系列快速内切酶提供一种通用酶切Buffer，简化酶切反应体系；同时具有良好的酶活冗余度，轻松应对底物过量或困难模板酶切。

• 5～15min内完成酶切反应。
  
• 一种通用的酶切Buffer。
  
• 良好的酶活冗余度。

• 功能活性检测：最适反应温度下，在20μL反应体系中，1μL酶能够在15min内完全消化1μg λDNA (HindIII digest)。
  
• 超长时间温育检测：最适反应温度下，将1μL酶与1μg λDNA (HindIII digest)共孵育3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，但延长孵育时间可能出现星号活性。
  
• 酶切-连接-再酶切检测：最适反应温度下，使用1μL酶消化底物，回收酶切产物，在22℃下使用适量T4 DNA连接酶可以将酶切产物重新连接，将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
  
• 非特异性内切酶活性检测：最适反应温度下，将1μL酶与1μg超螺旋质粒DNA共同孵育4h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒DNA仍然处于超螺旋状态。

• 酶切前建议对PCR产物进行纯化。
  
• 3小时温育未表现星号活性，延时酶切可能出现星号活性。
  
• 受CpG甲基化影响，序列可能重叠，剪切阻断。
  
• 所有内切酶的使用体积总和不得超过总反应体系的1/10。
  
• 失活条件为80℃温育20min。

• DNA的快速酶切
  
  • 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系。
    

    成分	质粒DNA	PCR产物	基因组DNA
    ddH2O	15μL	16μL	30μL
    10×GenCut Buffer	2μL	3μL*	5μL
    底物DNA	2μL（~1μg）	10μL（~0.2μg）	10μL（5μg）
    GenCut ApaLI	1μL	1μL	5μL
    总体积	20μL	30μL	50μL

    注^*：本体系指已纯化后的PCR产物。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10×GenCut Buffer加入量可适当减少至2μL。若下一步进行克隆等实验，酶切前需纯化PCR产物。
    
  • 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。
    
  • 37℃孵育15min（质粒），或15～30min（PCR产物），或30～60min（基因组DNA）。
    
  • 80℃温育20min即可使酶失活，停止反应（可选）。
• 双酶切或多酶切
  
  • 每种快速内切酶的用量为1μL，并根据需要适当扩大反应体系。
    
  • 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。
    
  • 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。
• 适用于质粒的扩大反应体系
  

  DNA	1μg	2μg	3μg	4μg	5μg
  GenCut ApaLI	1μL	2μL	3μL	4μL	5μL
  10×GenCut Buffer	2μL	2μL	3μL	4μL	5μL
  总体积	20μL	20μL	30μL	40μL	50μL

• 不同DNA种的酶切位点数量
  

  λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
  4	1	3	3	3	0	1	7

  
  
• 甲基化修饰影响
  

  Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
  无影响	无影响	序列可能重叠剪切阻断	无影响	无影响

  
  
• 在不同反应缓冲液中的活性
  

  缓冲液	GenCut Buffer	Thermo Scientific FastDigest Buffer	NEB CutSmart Buffer	Takara QuickCut Buffer
  活性	100%	75%	100%	100%

  
  
• 同裂酶
  Alw44I、VneI。
  同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。